小体积移液:应用于化合物
管理、筛选和工作流程的验证.

化合物管理、筛选和验证工作流程通常包括四种不同的小体积移液操作:

  • 随机挑取:从来源于微孔板和试管的化合物库中挑取化合物并进行重排;
  • 孔板重排:适用于96、384和1536孔板
  • 连续或者直接的梯度稀释:用于剂量反应实验
  • 矩阵点样:创建用于实验板的重复孔

 

尽管利用声波液滴喷射和数字化分液器无疑是创建化合物稀释系列的较好选择,但它们仍然依赖上游液体处理步骤来挑选化合物并将其转移到专门的源板或盒中。 此方法虽然可以从仅有一种试剂的源板中创建多个实验板,但该过程可能很费力。

小体积、以固相置换为原理的液体工作站如mosquito LV和mosquito X1不仅是以声波和数字化分配为原理的工作站的有效替代(并能对其进行补充),还拥有以下独特优势:

  • 死体积极低,每孔仅为0.5 uL
  • mosquito LV:在一台机器上可同时实现梯度稀释、重排、矩阵点样以及为声波加样创建源板
  • mosquito X1:可以完成从微孔板或试管中进行多功能和小体积的随意挑取

实验体系的微缩化.

随着更多疾病生理模型(例如 3D 细胞培养)和研究疾病生物学的新技术(例如 CRISPR-Cas9 基因编辑和二代测序)的广泛应用,检测试剂的成本在显著增加。

实验体系的微缩化是降低试剂成本的有效途径。将反应体系从 96 孔板转换为 384 孔板通常可节省 4 倍以上的试剂,而从 96 孔板转换为 1536 孔板更可降低约 10 倍。这些成本效益有助于实现更高价值的研究、增加实验项目的产出并提高实验室的投资回报。以固相置换为原理的mosquito液体工作站和dragonfly多功能分液器是进行准确和精确实验体系微缩化的理想工具。通过微缩化,研究人员能够在不影响检测质量或数量的情况下,最大限度地发挥昂贵试剂的价值。

常见问题与解释.

哪些实验类型适合微缩化?

如不能微缩化至1536孔板,大多数实验类型(生化、细胞学和基因组学等)至少都可以微缩化至384孔板。对于小体系实验而言,必须减少蒸发的影响,以确保始终如一的高质量检测结果。通常,这些主要通过分液速度、主动或被动制冷模块和使用减低蒸发的屏障来实现。

在确定反应剂量时,我应该使用连续梯度稀释还是直接的化合物梯度稀释?

视情况而定。连续梯度稀释比直接梯度稀释更快,也更容易建立。由于每个稀释点都取决于前一个点,因此存在累积重大误差的风险。选择此方法时,用户必须确保其仪器的移液性能符合严格的质量指标。对于直接梯度稀释而言,所有的稀释点都是独立建立的。虽然该方法不存在累积误差的风险,但没有一台仪器具有设置3-4 log稀释点所需的量程范围。因此,直接梯度稀释时,用户需要准备中间稀释液。

我需要担心静电影响吗?

小液滴容量易受到静电干扰,容易使液滴在孔板上发生反弹或偏转。接触式分液器往往不会受到静电问题的影响,因为液滴在接触模式下几乎没有不会发生偏转。非接触式分液器可能会在纳升级分液范围内和非常干燥的环境下(水分子会减少电荷积聚)产生更加明显的静电问题。如果担心静电干扰,研究人员可以使用各种工具,如电离风扇或防静电枪来消除电荷积聚。在某些情况下,只需将微孔板放在湿纸巾上几分钟就足以最大限度地减少静电影响。

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